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La cisticercosis es una enfermedad
causada por el estadio larvario (cisticerco)
de
Taenia solium
. El diagnóstico de la
enfermedad se ve limitado por la
disponibilidad de antígenos del parásito,
donde una alternativa sería la clonación de
genes codificantes de antígenos. En
T.
solium
, al igual que en otros parásitos,
ocurre un mecanismo alternativo en el
procesamiento de algunos ARNm,
denominado
trans-splicing,
en el cual una
pequeña molécula de ARN conocida como
Spliced Leader
(SL) es añadida al extremo
5 ́ de una molécula de pre-ARNm,
formando diferentes ARNm maduros que contienen un extremo 5 ́ común. Debido a
las limitaciones que presenta el
diagnóstico, además del interés en el
estudio de este mecanismo, el objetivo de
este trabajo fue clonar moléculas que
utilizan este procesamiento post-
transcripcional. Para ello, se realizó un
cribado mediante PCR a partir de
genotecas de expresión de cisticerco de
T.
solium
utilizando como cebador directo
TSSL-DW2 y como reverso ZAP-3 ́UP que
hibridan con la secuencia SL y con la del
vector, respectivamente. Se obtuvieron
productos de ADNc de diferentes tamaños,
que fueron clonados en un plásmido de
mantenimiento (pGEM-T-easy).
Posteriormente, mediante PCR de colonias
se verificó la presencia de los insertos y se
estimó su tamaño, obteniendo un total de
56 clones de tamaño variable (150-1200
pb). Este diseño permitió la identificación
de genes de
T. solium
que utilizan el
mecanismo de
trans-splicing; y
además de
ser una estrategia fácil para clonar
moléculas completas, abre camino para
futuras
investigaciones enfocadas en el
diagnóstico de cisticercosis. |
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