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Neurofibromatosis tipo 1 (NF1) es una condición autosomica dominante, notable por su variabilidad en la expresión fenotípica. El locus NF1 mapea en 17q11.2 y codifica una proteína, la neurofibromina, cuya función principal es la de ser un supresor tumoral. Como una aproximación que nos permita adelantar en el reconocimiento de las causas que determinan la amplia variabilidad fenotípica de la condición, incluso entre miembros afectados de una misma familia que se infiere portan la misma mutación, se cumplió este estudio en 33 familias con casos afectados provenientes de distintas localidades del país, que incluyó: evaluación genealógica, clínica, estadística y molecular. Un número total de 70 pacientes fue diagnosticado de acuerdo a criterios internacionalmente establecidos: 53 de sexo femenino y17 de sexo masculino. De estos, 51 corresponden a casos segregantes y 19, a casos esporádicos resultantes de neomutaciones. Las principales manifestaciones diagnósticas incluyen: máculas “café con leche”, neurofibromas cutáneos y nódulos de Lisch, cuyo número y tamaño varía grandemente de paciente a paciente. Además, pueden darse otras manifestaciones características, que solo se presentan en algunos de los pacientes. El estudio muestra que, la relación con la edad es diferente para las máculas y los neurofibromas. El número de neurofibromas se incrementa con la edad, en tanto que el de máculas declina con la edad. De hecho, la correlación o parecido fenotípico en casos familiares se diferencia, en la medida en que se hace más distante la relación familiar. Por otra parte, en la muestra poblacional estudiada se identificaron dos casos (hembra y varón) no relacionados, afectados por la “rara” Variedad Espinal de NF1: uno segregante y el otro resultante de una neomutación. Así mismo, previo consentimiento informado, se realizaron estudios moleculares en ADN, tanto en afectados como en familiares accesibles, con fines de adelantar en el conocimiento de factores que pudieran estar influenciando o determinando la variabilidad fenotípica de la condición. De este modo, las secuencias de dos microsatélites-marcadores intragénicos: IVS27AC28.4 e IVS38GT53.0 fueron amplificadas mediante la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) y las formas alélicas fueron observadas por electroforesis. Se obtuvo en ambos marcadores una distribución alélica diferente entre afectados y no-afectados, resultando el microsatélite IVS38GT53.0 el más polimórfico. Aún cuando el tamaño de los alelos detectados todavía no ha sido determinado, los hallazgos reportados en esta Tesis son sugerentes de una asociación preferencial entre ciertas formas alélicas y la condición NF1. De ahí que, si esto resultara cierto, marcadores ligados al locus NF1como los usados en estos ensayos, serian de gran utilidad en los procedimientos de diagnóstico prenatal y de diagnóstico de niños “presintomáticos” en situación de riesgo, provenientes de familias con antecedentes de la enfermedad. Por otra parte, como las mutaciones en el gen TP53, un represor tumoral, frecuentemente están presentes en NF1, se seleccionó un grupo de afectados por la condición y se amplificaron por PCR las secuencias correspondientes a los exones 7-9 del mismo. En este segmento genómico de TP53 suelen reportarse distintos tipos de mutaciones asociadas a NF1, por lo que cuatro de los productos PCR de casos índice y tres de familiares afectados fueron escrutados mediante análisis de Polimorfismo de Conformación de Cadena Sencilla (SSCP). En tres de las muestras de casos índice se observó un patrón de movilidad electroforética distinto al control normal y en otra no se evidenciaron alteraciones. La secuenciación de los segmentos genómicos correspondientes fue realizada en el CeSSAN (IVIC) y posible solo en dos de la muestras (0891 y 0912). Mediante alineamiento de las respectivas secuencias se comprobó que, 0891 no mostraba alteraciones en este segmento; en tanto que, 0912 evidenció la inserción de un nucleótido (T) hacia el extremo 3’ del exón 9, la cual causa un cambio en el marco de lectura que origina una modificación en la secuencia de aminoácidos del transcrito (TP53), además que la cadena peptídica queda truncada por la introducción de un codón de parada (tga) en la posición 336. La mutación ocurrió en el dominio carboxi-terminal de la TP53 (residuos 319-360), el cual media en la oligomerización de la molécula; que es el proceso conformacional mediante el cual, en condiciones normales, la TP53 forma tetrámeros para desempeñar su actividad de supresor tumoral. Su truncamiento lleva a la formación de dímeros en lugar de tetrámeros, afectando la estabilidad termodinámica del dominio de tetramerización y con ello su correcto plegamiento. Por cuanto la TP53 es solo marginalmente estable a la temperatura corporal, cualquier mutación que reduzca aún más su estabilidad, contribuye a la alteración del proceso de plegamiento de la molécula in vivo. Este trabajo se enmarca dentro de las líneas de investigación del Programa de Doctorado en Ciencias Médicas relativas a la Genética Médica y la Biología Molecular (Genética Molecular). |
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